Mammalian cell
Cell Seeding
์คํ์ ํ์ํ ์ ํํ ์ธํฌ ์๋ฅผ ๊ณ์ฐํ์ฌ ์ ํฉํ well dish์ ์ธํฌ๋ฅผ ๋ถ๋ฐฐํ์ฌ ์ธํฌ ๋ฐฐ์ํ๋ค.
์ค๋น๋ฌผ
Complete media:
PBS:
Trypsin-EDTA (T/E)
์คํ ๊ณผ์
Complete media, PBS, T/E๋ฅผ ๊บผ๋ด์ 37โ water bath์ 10~15๋ถ ๋ฃ์ด์ ๋ฏธ๋ฆฌ ๋ฐ์ ๋๋ค.
Suction์ผ๋ก cell dish์ media๋ฅผ ์ ๊ฑฐํ๋ค.
PBS๋ก wash ํ, suction์ผ๋ก ์ ๊ฑฐ โ ์ฃฝ์ ์ธํฌ, ์ด๋ฌผ์ง, ๋จ์ media
Trypsin EDTA๋ฅผ ๋ฃ๊ณ ๋ถ๋๋ฝ๊ฒ ํผ๋จ๋ฆฌ๊ณ , Incubator 1~2๋ถ โ adhesion ๋จ๋ฐฑ์ง์ ๋ผ์ด๋ด ์ค
15ml ํ๋ธ(tube)์ 9ml media + 1ml cell containing trypsin EDTA solution์ ์ต๋ํ ๋ชจ์ ๋ฃ๋๋ค
์์ฌ ๋ถ๋ฆฌ(Centrifuge) = 1000 rpm์ผ๋ก 3๋ถ ๋๋ ค์ cell pellet์ ๋ง๋ ๋ค.
์์ธต์ก์ ์ ๊ฑฐํ๊ณ , tube์ 5ml media ์ฒจ๊ฐํด์ ์ธํฌ๋ฅผ ํ์ด์ค๋ค.
Cell counting โ 10 ฮผl cell media + 10 ฮผl 0.4% trypan blue stain(์ผ์์ฝ)
๊ฐ well๋ง๋ค 3ml media ์ฒจ๊ฐ โ 6well ๊ธฐ์ค, ๊ฐ well๋ง๋ค = media 3ml (๊ณ ์ ๊ฐ) + counting cell (ฮผl). cell counting ๊ณ์ฐ ๊ฒฐ๊ณผ์ ๋ง๋ ์์ ํผํซ(pipette)์ผ๋ก ๋ฐ์ dish์ ๋ฃ๋๋ค.
์ธํฌ๊ฐ dish์ ์ ์ ํ๊ฒ ์๋์ง ํ๋ฏธ๊ฒฝ์ผ๋ก ๊ด์ฐฐ
Incubator์ ๋ฃ๊ณ ๋ฐฐ์ํ๋ค.
Last updated